Синтезы ЛСД и выделение алкалоидов спорыньи.

Синтезы ЛСД и выделение алкалоидов спорынь и. 1) Предоставлено Иа СИНТЕЗ: 1. гидролиз эрготамина до лизергиновой кислоты Раствор 6,7 г KOH в 100 м л воды, в инертной атмосфере и с магнитной мешалкой, был нагрет до 75°C, и доб авлено 10 г эрготамина тартрата. Реакционная смесь пожелтела при переход е эрготамина в раствор в течение приблизительно часа. Перемешивание про должалось ещё 3 часа. Реакционную смесь охладили до приблизительно 10°C вне шней ледяной баней, и подкислили примерно до pH=3.0 прикапыванием 2,5-нормальн ой H2SO4. В начале нейтрализации стал выпадать белый осадок; потребовалось п риблизительно 60 мл серной кислоты. Прохлаждалось ночь, осадок отфильтро ван, и фильтр промыт 10-ю мл эфира. 2. очистка Сухой осадок был перенесён в лаб. стакан, растворён в 50 мл 15% амми ака в безводном этаноле, перемешивался час, и отделён декантацией. Эта эк стракция была повторена, и первая decantation смешана со вторым экстрактом и проф ильтрована для удаления нескольких сот миллиграммов ненужных осадков. Чистый фильтрат был высушен в вакууме, остаток растворён в 50 мл 1%-го нашаты рного спирта, и это раствор подкислен, как ранее, 2,5-нормальной H2SO4. Выпавший осадок отфильтрован и промыт эфиром до обесцвечивания. После вакуумной сушки до постоянного веса осталось 3.5 г d-лизергиновой кислоты гидрата, ко торый надо хранить в тёмном закупоренном сосуде. 3. синтез ЛСД Суспензия 3.15 г d-лизергиновой кислоты гидрата и 7.1 г диэтиламина в 150 мл CHCl3 была помещена под обратный холодильник (reflux) с перемешиванием. Без внешнего наг рева, было добавлено 3.4 г POCl3 в течение 2 мин, в темпе, соответствующем условия м. Смесь держали at reflux дополнительные 5 мин, пока всё не растворилось. После о хлаждения до комнатной температуры, раствор был прилит к 200 мл однонормал ьного NH4OH. Фазы были разделены, органическая фаза высушена над безводным MgSO4, профильтрована, и растворитель удалён под вакуумом. [ хроматография - для идентификации ] The residue was chromatographed over alumina with elution employing a 3:1 C6H6/CHCl3 mixture, and the collected fraction stripped of solvent under hard vacuum to a constant weight. This free-base solid can be recrystallize d from benzene to give white crystals with a melting point of 87-92 °C...[- дальше пропускаю ] 4. получение тартрата ЛСД Это основание было растворено в тёплом сухом MeOH, используя 4 мл на грамм про дукта. Затем была добавлена сухая d-винная кислота (0.232 грамма на грамм осно вания ЛСД), и в чистый тёплый раствор добавлен по каплям Et2O, пока помутнение не перестало рассеиваться при продолжающемся перемешивании. Эта непро зрачность указывает на хорошую кристаллическую взвесь (это достигаетс я быстрее с затравкой [with seeding]) и раствор оставлен на ночь в холодильнике для кристаллизации. Во время этих процедур должна быть темнота. Продукт извл ечён фильтрацией, экономно промыт холодным этанолом, холодной смесью 1:1 MeOH/Et2O, и затем высушен до постоянного веса. Белый кристаллический продукт был диэтиламида лизергиновой кислоты тартрат с двумя молекулами метан ола кристаллизации, с Т пл 200 °C с разложением, и весил 3.11 г (66%). Повторные перекристаллизации из метанола давали продукт, который стан овился всё менее растворимым, и в конечном счете фактически нерастворим ым, с увеличением чистоты. Полностью чистая и сухая соль при встряхивани и в темноте испускает маленькие вспышки белого света. ДОЗИРОВКА: от 60 до 200 микрограммов, перорально [! микро-, а не милли-] ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ: 8-12 часов ПОЯСНЕНИЯ И КОММЕНТАРИИ: [часть о нестабильности пропущена; хранить в х олоде, темноте, без доступа воздуха, в виде раствора соли; хлорированная в ода разрушает] Разработано и описано много методов синтеза ЛСД. Все они н ачинаются от лизергиновой кислоты, и по этой причине это вещество находи тся под контролем. The amide lysergamide, компонент семян нескольких сортов "утренней сл авы", тоже контролируется и, по закону, является депрессантом. Самые ранни е синтезы ЛСД использовали азидное промежуточное соединение (оригинал ьный процесс Хофманна, 1955), смешанные ангидриды с трифторуксусным ангидри дом (1956) или серный ангидрид (SO3-DMF с литиевой солью, 1959), пептидный конденсирующ ий агент карбонилдиимидазол (1960), либо хлорид кислоты [the acid chloride - хлорангидрид?] как активное промежуточное звено с POCl3, PCl5 или тионил хлоридом (1963) либо прост о оксихлорид фосфора (1973). Большинство методов неуспешны вследствие чрезм ерной чувствительности к влажности, образования побочных продуктов, ли бо эпимеризации или инверсии на углероде в 8-й позиции до d-iso-LSD. Процедура с POCl3 быстра и чиста, и сегодня является предпочтительным процессом для синте за широкого круга замещённых лизергамидов. 2) Метод Штолля (предоставлено Иа) Получение (примечание 1) Раствор 0,150 г солянокислого диэтиламина-1, 1`-C^14^2 в 0,5 м л воды замораживают на стенках трубки, погруженной в баню со смесью ацет она и сухого льда. Эту трубку заполняют гранулированным едким кали и при соединяют через трубку с натронной известью к реакционной пробирке, сод ержащей смесь 0,400 г кристаллического азида d-изолизергиновой кислоты (при мечание 2) и 4 мл диоксана, замороженной в жидком азоте (рис. II, 1). При расплавле нии раствора солянокислой соли и взаимодействии со щелочью выделяется свободный амин. Смесь вновь замораживают жидким азотом, прибор эвакуиру ют до 10^-3 мм. рт. ст. и перегоняют диэтиламин-1,1'-С^14^2 в реакционную пробирку (в ко нце выдерживают смесь при температуре 40± в течение 15 мин.). Систему заполня ют сухим азотом, пробирку закрывают и выдерживают при 55± в течение 2 час. См есь испаряют в вакууме, остаток растворяют в разбавленной винной кислот е, раствор подщелачивают карбонатом натрия и экстрагируют эфиром (общий объем эфира 100 мл). Неочищенный продукт, полученный после испарения раство рителя, растворяют в хлороформе и хроматографируют на окиси алюминия (40 г ). Первую фракцию элюата, которая дает при ультрофиолетовом освещении ин тенсивно синюю флуоресценцию, испаряют досуха. При растворении в нескол ьких каплях этилацетата и разбовлении 20 объемами эфира получают первую порцию чистого продукта, который отфильтровывают на фильтре Гифло. Выхо д диамида 0.060 г; т. пл. 82-83 градуса (разл). Остатки, полученные из маточного раств ора и последующих фракций, объединяют, растворяют в 5 мл абсолютного спир та и обрабатывают 0,5 мл 4 н. раствора едкого кали (примечание 3). Раствор выдер живают при комнатной температуре в течение 1,5 часа, затем подкисляют разб авленным раствором винной кислоты. концентрируют, подщелачивают бикар бонатом натрия и экстрагируют эфиром. Экстракт испаряют и остаток очища ют хроматографиро-ванием; выход продукта 0,060 г. Из маточного раствора полу чают последнюю порцию вещества (0,020 г), причем общий выход продукта станови тся равным 0,140 г. Молярная удельная активность равна активности исходного соединения. 1. Этот способ синтеза основан на методе Штолля (1). Поскольку вещество неус тойчиво к действию света и кислорода воздуха, его следует получать как м ожно быстрее (30 час.), защищая от дневного света. 2. Исходное кристаллическое вещество получают непосредственно перед опытом концентрированием эфи рного экстракта раствора солянокислого азида d-изолизергиновой кислот ы и бикарбоната натрия. Получение соли взаимодействием азотистой кисло ты с гидразидом описано Гофманном (2). 3. N,N-бис-(Этил-1-С^14)-амид изолизергиновой кислоты в щелочном растворе перегруппировывается. Температура плавлен ия N, N-диэтиламида d-изолизергиновой кислоты 182± (разл.) (1). Лизергиновая и изол изергиновая кислоты различаются пространственным расположением карб оксила и водородного атома в положении С-8 (3). ЛИТЕРАТУРА 1. Stoll A., Hofmann A., Helv. Chim. Acta, 26, 944 (1943). 2. Hofmann A., Helv. Chim. Acta, 30, 44 (1947). 3. Stoll A., Rutschmann J., Hofmann A., Gunthard H. H., Helv. Chim. Acta, 37, 2039 (1954). 3) И еще синтезов ! (опять-таки предоставлено Иа) https://www.the-hive.ws/forum/showflat.pl?Number=346626 Привожу описание синтеза из статьи 43-го года. Перевод сделан с журнала, а не с интернета. Небольшие сокращения касаются ра зделения изомеров, которо е очень сложно и не нужно. О днако сам я этого не делал, поэтому все вопросы к автору. 1. Получение гидразида изолизергиновой кислоты. Можно использовать один из известных алкалоидо в спорыньи, или их смесь. При нижеследующих условиях не расщепляются гид разином только алкалоиды типа эргобазин. 10г высушенного в высоком вакууме эрготамина нагревают ся с с 10мл безводного гидразина в круглой колбе с притертым обратным холо дильником на масляной бане до несильного кипения (130-140С). В течение 10мин. алк алоид полностью растворяется. Кипятить еще 20мин., затем разбавить горячи й раствор 5.6мл воды, чтобы п еревести гидразин в гидразингидрат. Гидразид изолизергиновой кислоты в этой форме намного менее растворим, чем в безводном гидразине, и сразу н ачинает осаждаться в виде почти бесцветных кристаллов. После 15мин. дальн ейшего кипячения раствор следует охладить и для завер- шения кристаллизации дать постоя ть еще 6 часов. Выкристаллизовавшийся гидразид отсасывается и промывает ся небольшим количеством чистого спирта. Выход 3.4г (70%) почти чистого гидраз ида изолизергиновой кислоты. Однократная перекристаллизация из 300-кратн ого количества кипящего спирта, из которого соединение осаждается в вид е прозрачных 6-угольных пластинок, дает аналитически чистый препарат. Пр и 240С он нерезко плавится с разложением. 2. Превращение гидразида изолизергиновой кислоты в гидразид лизергинов ой кислоты. Гидразиды изол изергиновой кислоты можно перевести в дериваты лизергиновой кислоты к ак путем кипячения со спиртовой фосфорной кислотой, так и мягким действи ем спиртовой щелочи, причем последний путь оказался особо выгодным. 10г г идразида изолизергиновой кислоты при нагревании растворяются в 200мл чис того этилового спирта, раствор быстро выпаривается в вакууме до 40мл и тот час же, прежде, чем начнется кристаллизация, смешивается с 4мл 4-n. 50%-ной водно -спиртовой калийной щелочи. При стоянии в темноте при комнатной температ уре гидразид лизергиновой кислоты через час начинает кристаллизоватьс я в длинные, соединяющиеся в пучки иглы. Через день превратившееся в густ ую кристаллическую кашу вещество отсасывается и промывается небольшим количеством чистого спирта. Выход 6г чистого гидразида лизергиновой кис лоты. Гидразид лизергиновой кислоты очень трудно растворим в воде, эфире и бензоле. 3.Превращение гидразида изолизергиновой кислоты в азид. 2.82г (0.01моль) мелко измельченного (до п орошка) гидразида изолизергиновой кислоты (в прохладных условиях) раств оряются в 100мл 0.1n. соляной кислоты. Охлаждают до 0С и добавляют непрерывной с труей 10.0мл 1n. холодного раствора нитрита натрия, после чего при интенсивно м помешивании тотчас же и в течение 2-3 минут добавляют более чем 100мл 0.1n. соля ной кислоты, до тех пор, пока раствор отчетливо кисло среагирует на лакму совой бумаге. Для завершения почти моментально протекающего превращен ия в азид дают постоять еще 5 минут при 0С, добавляют слой из 300мл эфира, смеши вают с избыточным 1n. раствором гидрокарбоната натрия и путем встряхиван ия переводят светло-желтые, объемистые хлопья азида в эфир. Гидрокарбона тный щелочной маточный раствор встряхивают второй раз с 50мл эфира. Соеди ненные эфирные растворы промываются еще 2 раза 20мл воды и потом в защищенн ых от света условиях в теч ение 15-20мин. высушиваются при 0С прокаленным карбонатом калия. 4. Получение диэтиламида изолизергиновой и лизергиновой кислот (всегда п олучается смесь изомеров, хотя значительно преобладает тот из них, котор ый был исходным). Полученн ый из 1.0г гидразида изолизергиновой кислоты эфирный раствор азида смеши вали с 3.0 куб.см диэтиламина и давали постоять при 20С ночь. 4) Предоставлено Трики: Я тут был в гостях у lsdinfo.by.ru (хотел почитать его трип-репорт про триган ) и обнар ужил там следующий текст (очень странно, что номер патента совпадает с те м, что постил Заратустра, но пропись другая): Приготовление LSD (химическим путем) Приготовление амидов лизергиновой кислоты. Патентный Отдел США 2, 736, 728. Запатентовано: 28 февраля 1956 года. Richard P. Pioch, Indianapolis, Indiana, assigmor, to Eli Lilly and Co., Indianapolis, Indiana, a corporation of Indiana. No drawing. Application December 6, 1954, Serial No. 473,443. 10 Claims (Cl. 260-285.5) Это открытие касается приготовления амидов лизергиновой кислоты и со здания промежуточного соединения, необходимого при приготовлении лизе ргиновой кислоты. Хотя известны лишь несколько природных и искусственн о полученных амидов лизергиновой кислоты, они обладают рядом различных полезных фармакологических свойств. Особенно полезен эргоновин, N-(1(+)-1-гид роксоизопропил)-амид d-лизергиновой кислоты, который в промышленности пр именяется как окислитель ?!! . Попытки получить амиды лизергиновой кислоты обычным способом выделени я амидов, так же как и взаимодействие аминов с хлоридом лизергиновой кис лоты или ее анионом ,были безуспешны. Патенты США описывают процессы пол учения амидов лизергиновой кислоты, хотя эти процессы эффективны как до полнение к желаемому превращению лизергиновой кислоты в один из ее амид ов, они все же лишены преимуществ. Предлагаемый ниже способ достаточно п ростой и удобный для получения амидов лизергиновой кислоты, который поз воляет провести реакцию между лизергиновой кислотой и ангидридом трих лоруксусной кислоты, чтобы получить смесь лизергиновой и трифторуксус ной кислот, а затем провести взаимодействие смеси ангидридов с азотисты ми соединениями, имеющими не менее одной связи водород-азот. Полученный амид лизергиновой кислоты выделяется из смеси удобным способом. Взаимодействие лизергинового и трифторуксусного ангидридов происход ит при низкой температуре, это значит, что реакция может проходить при те мпературе около 0° С. Предпочтителен интервал от -15° до -20° С. Этот интервал в ызывает достаточно высокие температуры, чтобы реакция проходила быстр о; он позволяет также принять меры предосторожности против слишком боль шой скорости реакции, развития слишкой высокой температуры и, следовате льно, возможного нежелательного разложения смеси ангидридов. Реакция проходит в среде соответствующего дисперсанта, который являет ся инертным по отношению к реагентам. Лизергиновая кислота малораствор има в реагентах, пригодных для проведения реакции, поэтому она находится в виде взвеси в дисперсанте. Требуется 2 галлона (9,0922 литра) трифторуксусной кислоты на моль лизергинов ой кислоты для быстрого и полного превращения лизергиновой кислоты в см есь ангидридов. Оказалось, что молекула ангидрида связывается с одной мо лекулой лизергина, которая содержит основной атом азота, и это тот самый отдукт, который реагирует со второй молекулой трифторуксусного ангидр ида, чтобы образовать ангидрид, находящийся в смеси с одной молекулой тр ифторуксусной кислоты. Превращение лизергиновой кислоты в смешанный а нгидрид происходит за относительно короткое время, но, чтобы реакция про шла полностью, требуется около трех часов. Смесь ангидридов лизергиновой и трифторуксусной кислоты относительно неустойчива, особенно при комнатной температуре, а также при более высок их температурах, поэтому ее следует хранить при низкой температуре. Терм ическая неустойчивость ангидрида в смеси делает желательным превращен ие его в лизергиновую кислоту без лишних потерь. Сам ангидрид, поскольку он содержит группу лизергиновой кислоты, также может существовать в сме си большей частью в виде аддукта в ионной форме совместно с ангидридом т рифторуксусной кислоты или самой кислотой. Для максимального выхода пр одукта очень важно, чтобы полученная лизергиновая кислота была бы безво дной. Для обезвоживания кислоты проще всего ее нагреть до 105-11О ° С в вакуум е примерно 1 мм ртутного столба в течение нескольких часов, так как других подходящих способов обезвоживания кислоты нет. Превращение смешанного ангидрида в амид посредством взаимодействия ангидрида с азотистым осн ованием, таким, как аминогруппа, следует проводить при температурах, рав ных комнатной или ниже. Наиболее удобно проводить реакцию, добавляя охла жденный раствор смешанного ангидрида к аминосоединению, имеющему приб лизительно комнатную температуру. Из-за того, что кислотные реагенты при сутствуют в реакционной смеси в виде смешанного ангидрида, для максимал ьно полного превращения требуется около пяти моль-эквивалентов аминог рупп на один моль-эквивалент смешанного ангидрида. Для того, чтобы смеша нный ангидрид полностью вошел в реакцию, желательно в реакционную смесь дать несколько больше реагента, чем пять моль. При желании можно использ овать основное соединение, способное частично нейтрализовать кислотны е составляющие, находящиеся в реакционной смеси. Примером такого соедин ения может служить третичный амин. В этом случае примерно один моль-экви валент аминосоединения будет превращен в амид лизергиновой кислоты, а л изергиновая кислота, не участвовавшая в реакции, может быть удалена из р еакционной смеси и использована еще раз в других реакциях. Проводится это превращение по следующему методу: Безводную лизергинов ую кислоту диспергируют в подходящей среде, например, в амилнитриле, и су спензию охлаждают до -15 -20° С. В суспензию медленно добавляют раствор, содер жащий примерно два моль-эквивалента трифторуксусной кислоты, предвари тельно охлажденный до -20° С. Смесь выдерживают при низкой температуре в те чение 1-3 часов, чтобы образовалась смесь ангидридов лизергиновой и трифт оруксусной кислот. Раствор смеси ангидридов добавляю к аминосоединени ю в количестве около пяти моль-эквивалентов для прохождения реакции. Хот я обычно аминосоединения предварительно растворяют, можно этого не дел ать. Реакцию с аминосоединением или его раствором следует проводить при комнатной или более низкой температуре. Реакционную смесь оставляют на 1-3 часа при комнатной температуре и желательно в темноте, а затем избыток растворителя можно удалить испарением в вакууме при температуре чуть в ыше комнатной. Осадок, состоящий из амида с избытком амина и его соли, вымы вается хлороформом и водой. Вода отделяется от раствора хлороформа, кото рый содержит амид; осадок много раз промывают водой, чтобы удалить избыт ок амина и его разнообразных солей, образовавшихся при реакции, включая и непрореагировавшую лизергиновую кислоту. Раствор хлороформа подверг ается испарению, удаляя остаток амида лизергиновой кислоты. Амид, получе нный таким способом, может быть легко очищен любым доступным методом. Ра створители и дисперсионная среда, которые используются вами в этой реак ции, должны сохранять жидкое состояние при низких температурах и иметь и нертную природу, не вступая в реакции с лизергиновой кислотой и трифтору ксусным ангидридом. В качестве подходящих реагентов можно предложить: а милнитрил, диметилформамид, пропилнитрил, и тому подобные. Обычно другие реагенты используются довольно редко. Из перечисленных выше веществ на иболее подходит амилнитрил, поскольку он имеет малую реакционную спосо бность при температуре реакции, относительно летуч и легко отделяется о т реакционной смеси перегонкой в вакууме. Для получения амида лизергино вой кислоты можно предложить множество азотистых оснований, подходящи х для проведения реакции. Как уже было сказано, азотистое соединение дол жно иметь связь водород-азот, чтобы образовался амид. Для реакции можно в зять следующие аминосоединения: аммиак, гидразин, первичные амины, такие как глицин, этаноламин, диглицилглицин, аминопропанол, диэтиламин, эфед рин и другие. Когда в реакцию вступают такие вещества, как аминопропанол или любой спиртосодержащий амин, при взаимодействии с ангидридами лизе ргиновой или трихлоруксусной кислот, продукты реакции, к несчастью, соде ржат также аминогруппы. Вследствие двойственной природы спиртосодержа щих аминов образуются два изомера. Обычно количество примесного соедин ения не превышает 25-30%, от общего количества продукта реакции, но иногда это количество бывает существенно завышено. Аминогруппы очень редко можно превратить в желанный гидроксиламид, но выход продукта можно повысить, е сли обработать амин или его смесь с амидом спиртовым раствором щелочи, ч тобы провести превращение всех компонентов в необходимый гидроксоамид . Наиболее целесообразно проводить эту реакцию растворением амино-комп аунда или его смеси в минимальном количестве спирта, одновременно добав ляя в раствор двукратное количество 4-нормального раствора гидроксида к алия. Оставьте смесь на несколько часов при комнатной температуре, произ ойдет нейтрализация кислоты щелочью, а затем можно выделить и очистить а мид лизергиновой кислоты. Следует уяснить, что используемый выше термин "лизергиновая кислота" вкл ючает любой из четырех, или все четыре, стереоизомера, возможные в структ уре лизергиновой кислоты. Изомеры лизергиновой кислоты можно выделить и подвергнуть превращениям по методам, известным из литературы. Эту тран сформацию можно наглядно показать на следующих примерах. Пример первый Приготовление смеси ангидридов лизергиновой и трифторуксусной кислот: Приготовьте суспензию из 5,36 граммов d-лизергиновой кислоты в 125 мл амилни трила и охладите при -20° С. К суспензии добавьте охлажденный (до -20° С) раство р, содержащий 8,82 грамма трифторуксусной кислоты и 75 мл амилнитрила. Выдерж ите эту смесь при температуре -20° С в течение 1,5 часа для полного растворени я вещества, и d-лизергиновая кислота превратится в смесь ангидридов лизе ргиновой и трифторуксусной кислот. Смесь ангидридов можно выделить в ви де масла, если провести испарение растворителя в вакууме при температур е около нуля по Цельсию. Пример второй Приготовление N.N-диэтиламида d-лизергиновой кислоты: Раствор смеси анги дридов лизергиновой и трифторуксусной кислот в 200 мл амилнитрила можно п олучить, если провести реакцию лизергиновой кислоты массой 5,36 г с трифтор уксусной кислотой массой 8,82 г по первому методу. Амилнитрил, содержащий с месь ангидридов, следует добавить к раствору амилнитрила объемом 150 мл, со держащему 7,6 г диэтиламина. Смесь следует выдержать в темноте при комнатн ой температуре в течение примерно двух часов. Затем перегонкой в вакууме отделить амилнитрил от осадка; осадок содержит: "нормальные" и "изомерные " формы амида d-лизергиновой кислоты вместе с некоторым количеством лизе ргиновой кислоты и соль (продукт взаимодействия диэтиламина с лизергин овой кислотой и некоторое количество побочных продуктов). Осадок следуе т растворить в смеси 150 мл хлороформа и льда, полученного из 20 мл воды. Отдел ите верхний слой хлороформа и проведите экстракцию раствора пятью порц иями хлороформа объемом по 50 мл. Экстракты хлороформа объедините и четыр е раза промойте холодной водой (каждая порция воды имеет объем по 50 мл), что бы удалить остаточные количества солей аминов. Затем осушите экстракт х лороформа безводным сульфатом натрия и проведите испарение хлороформа в вакууме. Таким образом, получен твердый остаток, содержащий "нормальну ю" и "изомерную" формы М,Н-диэтиламида d-лизергиновой кислоты, массой 3,45 г. Вещ ество растворите в 160 мл смеси бензина и хлороформа, взятой в соотношении 3:1 и проведите хроматографию с помощью 240 граммов оксида алюминия. Если хро матография проводится на том же растворителе, то на колонке с оксидом ал юминия появятся две голубые светящиеся полоски. Зона N.N-диэтиламида d-лизе ргиновой кислоты будет двигаться быстрее, если пробу разбавить тем же ра створителем, что использовался ранее (объем растворителя около 3000 мл); раз бавление следует проводить, чтобы на хромотограмме не снижалась скорос ть продвижения наиболее мобильной зоны голубого окрашивания. Раствор о брабатывают лимонной кислотой для того, чтобы получить тартрат N.N-диэтил амида d-лизергиновой кислоты, который будет выделен. Тартрат N.N-диэтил ами да d-лизергиновой кислоты плавится с разложением при 190-196"С. N.N-диэтил амид ди- изо-лизергиновой кислоты, который адсорбируется на колонке из оксида ал юминия в виде второй флюоресцентной зоны, может быть удален растворение м в хлороформе. "Изо"форма амида может быть выделена после испарения хлор оформа в вакууме. Пример третий Приготовление амида N-диэтиламинэтил d-лизергиновой кислоты: По методу первому готовим раствор смеси ангидридов лизергиновой кислоты и трифт оруксусной кислоты из 2,68 г лизергиновой кислоты и 4,4 г ангидрида трифторук сусной кислоты, растворенных в 100 мл амилнитрила. Этот раствор следует доб авить к диэтиламинэтиламину массой 6,03 г. Реакционную смесь выдерживать п ри комнатной температуре в течение 1,5 часов. Амилнитрил испаряют, а остато к обрабатывают хлороформом, как описано в опыте втором. Обработанный оса док содержит N-диэтиламиноэтиламид d-изо-лизергиновой кислоты, его раств оряют в нескольких мл этилацетата, и раствор охлаждают при температуре о коло О° С; в процессе охлаждения из раствора кристаллизуется N-диэтилами ноэтил d-изо-лизергиновой кислоты. Кристаллы отфильтровывают, а фильтрат упаривают с целью получить дополнительное количество кристаллическог о амида. После перекристаллизации объединенных фракций кристаллов мож но получить N-диэтиламиноэтил d-изо-лизергиновой кислоты, плавящийся при 157-158°С. Оптическое соотношение следующее: [x]d= +372 градуса (с.= 1.3 в пиридин) 5) Выращивание культуры спорыньи (предоставлено Иа). Желто-коричневые ш аровидные склероции диаметром 2-4мм собирают осенью с кормового злака Paspalum dilatatum. Их тщательно очищают щеткой, затем вс тряхивают в следующих рас творителях (точно соблюдая время обработки): 1. 50%-ный н-пропанол (2мин.) 2. 4%-ны й раствор формалина (2мин.) 3. Стерильная дистиллированная вода (промыть 3 раза). Затем от склероциев отделяют тонкие сегменты, их на- носят на скошенный агар в пробирка х и выдерживают при 25С. Прор астание обычно происходит на 4-8-й день. Мицелий на ага- ре имеет цвет от желтовато-белого д о светло-коричневого, по- в ерхность похожа на вату. Всхожесть склероциев- около 90%. Через 14 дней выращивания вегетатив ный мицелий растира- ют ст ерильно в ступке и переносят в колбу Эрленмейера на 100мл с 25мл питательной среды NL563 (или колбу на 500мл со 100мл среды). Через 5-6 суток мицелий отделяют фильтрацией в асепти- ческих условиях (он образует шарик и коричневого цвета) и тща тельно промывают стерильной водой. Каждую 1/4 часть отмы- того мицелия переносят в такие же к олбы с таким же количест- в ом ферментационной среды NL500. После 7-суточного культиви- рования ферментацию прекращают, м ицелий отфильтровывают (его шарики достигают размера 3-4мм, жидкость к концу ферментаци и имеет цвет от светло-жел того до коричневого) и выделяют ал- калоиды, подщелачивая культуральную жидкость и взбалтыв ая ее с равным количеством хлороформа. Содержание алкалоидов в культуральной жидкости 100-150мкг/мл, в склероциях спорыньи- 0.006%. Состав сред: 1.Агар: Кукурузный экстракт (твердые вещества Staley)- 10 г. Кукурузный сироп (твердые веществ а Staley) - 5 г. Сахароза - 10 г. KH2PO4 - 0.5г. MgSO4*7H2O - 0.3г. Агар - 20 г. Дистилл. вода до 1000мл. 2.NL563 (предварительная): Кукурузный экстракт (твер дые вещества Staley)- 20 г. Кукуруз ный сироп (твердые вещества Staley) - 10 г. Сахароза - 20 г. KH2PO4 - 1 г. MgSO4*7H2O - 0.3г. Дистилл. вода до 1000мл. 3.NL500 (ферментационная): Сукцинат аммония - 30 г. Маннит - 30 г. KH2PO4 - 1 г. MgSO4*7H2O - 0.3г. 1,2 проп андиол - 30 мл. Дистилл. вода д о 1000мл. (довести PH до 5.1 10%-ной со- ляной кислотой). (Грегер Д., Ерге Д. Образование производных лизергино- вой кислоты в глубинной культуре claviceps paspali Stevens et Hall. Микробиология , 1966, Т.35, Вып.4, С.606-611.)

Приложенные файлы

  • rtf 11257589
    Размер файла: 156 kB Загрузок: 3

Добавить комментарий